第八节　输血前相关检测

一、血型检测

目前，检测ABO血型的方法有试管法、卡式微柱法、微量板法（96孔U型或V型）、凝胶试验法（geltest）、玻片或瓷板法、毛细管法以及PCR等多种方法（表2－2）。

表2－2　ABO血型检测结果判定

注：＋：表示结果阳性；－：表示结果阴性

一般仅做Rh D定型，在家系调查、父权鉴定、产前检查时需要确定纯合子或杂合子，以及配血试验中发现不规则抗体时，才做Rh血型抗原全部表型定型。Rh血型鉴定操作方法有玻片法、试管法、微量板法、凝胶微柱法等（表2－3）。

表2－3　Rh表型与5种试剂血清的反应结果

续表

当血型鉴定不明确时，检查唾液中的血型物质，鉴定出正确的血型。

二、血型相关不规则抗体筛查

抗体效价随着时间的推移在体内可逐渐降低，在输血前交叉配血试验中不能被发现。当病人再次输入同种血液时，机体免疫系统产生免疫记忆，大量的同种抗体在短时间内即可产生而导致溶血性输血反应。输血前对受血者进行血清/血浆不规则抗体筛查，以发现有临床意义的不规则抗体。有临床意义的抗体是指能引起各类免疫性输血反应、新生儿溶血病、缩短输入红细胞存活时间且在37℃下有反应的特异性抗体。

筛查的抗体有IgM抗体、IgG抗体。IgG抗体主要是经输血或妊娠等免疫刺激产生，在盐水介质中不能凝集而只能致敏相应抗原的红细胞，必须通过特殊介质（酶、抗球蛋白、聚凝胺（polybrene，PEG等）才能使致敏红细胞出现凝集反应。因此检测的方法必须包括盐水介质检测法、非盐水介质法如抗球蛋白法、Polybrene法、酶法、凝胶法等（表2－4）。

三、交叉配血

交叉配血主要是检查受血者血清中有无破坏供者红细胞的抗体，使受、供者血液间没有可测的不相配合的抗原、抗体成分。原则上选择与受血者血样ABO、Rh血型相同的合格献血者作交叉配血试验。特殊情况下（如稀有血型抢救患者、异基因干细胞移植患者等）不同型血液也进行交叉配血。

交叉配血方法：交叉配血应在37℃孵育，除了盐水介质法外，至少还要有聚凝胺法，有条件的还可增加酶法、抗球蛋白试验、白蛋白介质、低离子强度介质、凝胶法等方法。在交叉配血的任何步骤中均不产生溶血或凝集的结果，供者的血液成分才可以给患者输注。

1.受血者血清对供者红细胞。一般称“主侧”配血，因为它是检测对供者红细胞起反应的抗体。

2.受血者红细胞对献血者血清。一般称“次侧”配血，因为它是检测对受血者红细胞起反应的抗体。

3.受血者红细胞对受血者血清。目的是显示自身抗体、直接抗球蛋白试验阳性及红细胞串钱状假阳性的存在，是自身对照。

注：对于同型交叉配血不合的问题，首先必须严格操作，一定要用标准血清和标准红细胞对血型作正反定型。临床医师应详细提供患者的疾病诊断，用药史、输血史，甚至家族史。

四、抗人球蛋白检测

直接抗人球蛋白试验用于检测红细胞是否被IgG型抗体或补体（C3、C4）致敏，结果阳性考虑红细胞被IgG型抗体或补体（C3、C4）致敏，可用于新生儿溶血、溶血性输血反应、自身免疫性溶血性贫血等的检测。

间接抗人球蛋白试验检测血清中是否存在IgG抗体或用IgG型试剂血清检定多种血型系统的红细胞抗原。

表2－4　被检血清与谱细胞反应格局表举例

结果分析：①盐水介质中无凝集，可以排除IgM 类抗体；根据反应格局表，被检血清与7号和9号谱细胞无凝集，划掉它们带有的抗原的抗体：－C，－c，－e，－Jk ^a， －Jk ^b， －Di ^b，－DO ^b，－k，－Fy ^a， －Fy ^b， －Yt ^a 抗体，最后只留下－D，－E，－K，－Di ^a，－DO ^a 不能排除。

②与被检血清与某些谱细胞在抗球蛋白介质、聚凝胺、酶介质中均有凝集，推断可能有Rh 抗体存在。与被检血清凝集的谱细胞全部是D 抗原和E 抗原阳性的细胞，而与被检血清无凝集的谱细胞全部是D 抗原和E 抗原阴性的细胞，因此可初步判定被检血清中有抗－D 和抗－E。

③用抗D 试剂血清和抗E 试剂血清检测被检红细胞，如果检测结果为D 抗原阳性，可排除抗－D；否则可排除抗－E；均阴性，则抗－D 和抗－E 均不可排除。

④需要补充至少2个ccdEe表型的鉴定细胞或换用另一套有多个ccdEe 表型的鉴定细胞实验。

五、抗体效价检测

抗A或抗B标准血清效价＞1∶128，亲和力≤15秒，冷凝集素效价＜1∶4，必须具有检出A₂、A₂B血型的能力

1.产前测定孕妇血清中Ig抗体的效价，如IgG抗A、抗B抗体，可作为母婴血型不合新生儿溶血病的预测和监控指标之一。

2.产后测定产妇血清中免疫性抗体的效价，如IgG抗A、抗B抗体，可作为诊断母婴血型不合的新生儿溶血病指标之一。

六、吸收放散试验

1.弱A（或B）抗原的检定，间接判定ABO血型。

2.分离抗体，只能分离混合抗体，不能分离复合抗体（复合抗体只与复合抗原起反应，不能通过吸收放散试验分开）。例如可以分离抗－E＋抗－c，不适用于分离抗－cE。

七、新生儿溶血病诊断试验

（1）夫、妻红细胞ABO、Rh（D）血型鉴定。

（2）孕妇血浆（清）免疫性血型抗体筛查及效价测定。

进行新生儿溶血病检测。

进行新生儿溶血病检测。

新生儿溶血病检测包括：血型定型、患儿红细胞直接抗球蛋白试验、游离抗体检测和抗体放散试验。

八、血小板配型相关检测

检测方法：固相凝集法。

1）血小板同种异体抗体检测：检测患者血清或血浆中是否含有血小板抗体，包括HLA抗体，HPA抗体及其他血小板反应性抗体。

2）血小板自身抗体检测：检测患者自身血小板结合抗体和自身游离抗体。

3）血小板交叉配型：采用多个供者血小板与患者进行交叉配型，为患者筛选相容性血小板进行输注。

4）血小板抗原定型。

5）血小板受者（患者）致敏状况的PRA检测。

1）针对与血小板抗体存在相关性的疾病（包括不良反应）以及需要血小板输注的患者，种类包括非溶血性输血反应、流产、不孕不育、肿瘤、白血病、再生障碍性贫血、溶血性贫血、特发性血小板减少症、新生儿血小板减少症、骨髓异常综合征、血小板输注无效症等疾病患者体内血小板抗体检测、血小板供者的筛查及血小板交叉配型（包括HLA抗体、HPA抗体及其他血小板反应性抗体）。

2）辅助临床血小板免疫性疾病的诊断和血小板供者的筛查。若采用含已知血小板抗体的抗血清进行试验则可对血小板进行抗原定型。

检测方法：采用PCR－SSP的方法。

检测内容：针对血小板特异性抗原（HPA1～6，15）共7个系统14个抗原进行基因分型（图2－4，表2－5）。

图2－4　HPA－1aa HPA－2aa HPA－3ab HPA－4aa HPA－5aa HPA－6aa HPA－15aa

表2－5　临床最相关的HPA系统和NAIT之间的关系

适用范围：

1.中心血站检测血小板献血者的基因分型，建立血小板供者库。

2.医院对需要输注血小板的患者进行基因分型检测，以便在中心血站寻找与其相匹配的血小板。

3.新生儿同种免疫性血小板减少症、输血后紫癜、被动引起的输血后紫癜病因学诊断。

4.国家和地区有关人类HPA基因分型的普查，为人类学研究和地区遗传背景提供资料。

（李健）