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第十五节 脑脊液其他蛋白测定
通过对CSF总蛋白中某些组分的测定,可协助判断血脑屏障的状况,以及导致CSF总蛋白升高的可能原因。此外,CSF中某些中枢神经系统疾病特异标志蛋白,如髓鞘碱性蛋白的测定,则有较高的诊断和预后评估价值。目前开展较多的是CSF白蛋白和免疫球蛋白G测定。
一、脑脊液白蛋白测定
因CSF中白蛋白浓度低,血清白蛋白测定的溴甲酚绿法和溴甲酚紫法灵敏度不能满足需要,需采用灵敏的定量免疫学方法进行准确测定,其中免疫透射比浊法在自动生化分析仪上即可完成,被广泛采用。脑脊液白蛋白( cerebrospinal fluid albumin,CSFALB)免疫透射比浊法检测的原理、操作、结果计算及注意事项,参阅本章第二节血清白蛋白测定中的免疫比浊法。
由于白蛋白为血浆蛋白的主要组分,分子量又较小,故CSF中经血脑屏障超滤进入的蛋白以白蛋白为主。根据CSF中白蛋白浓度,结合同时测定的血清白蛋白浓度,计算CSF白蛋白/血清白蛋白比值,可判断血脑屏障通透性的改变,了解CSF蛋白的来源。
【参考区间】
成人腰池CSF白蛋白(免疫透射比浊法) : 140~230mg/L; CSF白蛋白/血清白蛋白比值: 0.5~0.8。
以上参考区间引自试剂说明书。各实验室应建立自己的参考区间。
【临床意义】
主要用于判断血脑屏障通透性。CSF总蛋白升高同时CSF白蛋白/血清白蛋白比值亦升高,提示各种原因导致血脑屏障通透性增加,血浆白蛋白大量经血脑屏障超滤入CSF。颅内疾病等虽然CSF总蛋白升高,但只要未累及血脑屏障通透性,该比值反降低。
二、脑脊液免疫球蛋白G测定
免疫球蛋白G ( immunoglobulin G,IgG)是由两条轻链(κ或λ)和两条γ重链组成的,分子量144~150kD。IgG约占血浆免疫球蛋白的80%。由于IgG分子量远大于白蛋白,难以透过血脑屏障进入CSF,CSF中IgG含量低,主要用各种定量免疫学方法检测,下面以常用并且可靠的免疫比浊法为例介绍。
【原理】
抗人IgG多或单克隆抗体与CSF中IgG通过抗原-抗体反应特异性结合,形成免疫复合物微粒,导致浊度增加。在一定条件下,浊度的增加与免疫复合物微粒数即IgG数相关,得以定量样本中IgG浓度。浊度检测有散射浊度法和透射浊度法2类。透射浊度法可在自动生化分析仪上完成,较多采用。下面以IgG的透射浊度法测定为例介绍。
【试剂】
选用有正式批文、量值可溯源至人血清蛋白参考物CRM 470的质量可靠产品。下面以IgG透射浊度法某试剂盒为例。该试剂盒包括:
1.试剂1
20mmol/L Tris缓冲液( pH 8.0)含200mmol/L NaCl、3.6%聚乙二醇、防腐剂及稳定剂。
2.试剂2
20mmol/L Tris缓冲液( pH 8.0)含已标定滴度的羊抗人IgG抗体、150mmol/L NaCl、防腐剂。
【操作】
不同实验室具体反应条件会因所用仪器和试剂而异,在保证方法可靠的前提下,应按仪器和试剂说明书设定测定条件,进行定标品、质控样品和样品分析。
【结果计算】
仪器自动根据系列稀释的CSF标准品(已溯源至人血清蛋白参考物CRM 470)浓度及对应的吸光度,以多点定标方式建立标准曲线或方程式,计算出样本中IgG浓度。
【参考区间】
成人腰池CSF IgG (免疫透射比浊法)参考区间: 10~30mg/L ( 66.7~200nmol/L)。2种单位间换算公式为mg/L×6.67 = nmol/L。
以上参考区间引自试剂说明书。
【注意事项】 1.方法学特点
本法对CSF IgG的最低检测限为4mg/L,线性范围4.00~200mg/L,批内、批间CV均≤3.5%。轻中度黄疸及溶血对本法CSF的IgG测定无明显干扰,与IgA和IgM未发现交叉反应。
2.影响因素
有关免疫比浊法的一些共同影响因素,参阅本章第二节血清白蛋白测定中免疫比浊法的注意事项。
3.参考区间应用
以其他定量免疫学方法,包括散射比浊法及透射免疫浊度法不同厂家试剂盒测定的结果均存在差异,应建立使用方法的本实验室参考区间。
【临床意义】
CSF IgG多结合CSF白蛋白( Alb)、血清IgG和Alb测定,计算CSF中IgG比值( CSF IgG/CSF Alb)、IgG指数[( CSF IgG/血清IgG) /( CSF Alb/血清Alb)]或24小时鞘内IgG合成率等指标,判断CSF IgG来源以辅助诊断颅内疾病。上述计算指标参考区间尚无公认,多数文献报道IgG比值为0.12~0.21,IgG指数<0.7。
若CSF IgG升高,但IgG比值特别是IgG指数正常,提示为血脑屏障通透性升高,血浆中IgG和Alb接近等比例超滤入CSF所致;而CSF IgG升高同时伴有IgG比值和IgG指数也升高,提示为颅内炎症性疾病时局部大量生成的IgG进入CSF所致,特别是累及脑脊髓膜的感染性炎症升高更显著。